恒溫?fù)u床在蛋白質(zhì)免疫反應(yīng)中的應(yīng)用：

① 封閉：將轉(zhuǎn)膜后的PVDF膜浸沒在5%脫脂奶粉封閉液中封閉，搖床 50～60轉(zhuǎn)， 2 小時(shí)（室溫）。

② 一抗孵育：根據(jù)抗體說明書選擇適當(dāng)濃度稀釋抗體，將稀釋好的抗體加入抗體孵育盒，并將PVDF膜放入其中，搖床50～60轉(zhuǎn),4℃孵育過夜。次日取出，TBST洗膜（3次/15 min，60轉(zhuǎn)）。

③ 二抗孵育：將二抗稀釋為合適的濃度，PVDF膜放入稀釋的二抗工作液中，室溫孵育1小時(shí)，搖床80轉(zhuǎn)。孵育結(jié)束后，取出PVDF膜，TBST洗膜（3次/15 min，80轉(zhuǎn)）

④ 顯影：吸取適量的化學(xué)發(fā)光試劑A液和B液，等體積混合，均勻加在PVDF膜上，孵育數(shù)十秒，使用凝膠成像系統(tǒng)曝光并獲取圖像。經(jīng)凝膠成像系統(tǒng)測量條帶灰度值，計(jì)算實(shí)驗(yàn)蛋白的相對表達(dá)量